』遏型站生造…1981年—旦上l』丝璎——T细胞生长因q-的研究‘免疫调变剂对T细胞生长因子产生的影响吴易元张军杨艺(中国医学科学院肿瘤研究研免疫室，北京)T细胞生长因子(简称TCGF或IL—2)是近年来国际上研究得很活跃的一种淋巴因子。它涉及免疫细胞的成熟和分化、免疫调控、建株、分子免疫学等多个重要的领域，与肿瘤及免疫性疾病亦密切相关。因此，研究TCGF具有重大的理论意义和应用潜力。有关TCGF的产生及其参与免疫反应的机理迄今尚未阐明，探讨免疫调变剂对TCGF产生的作用是很重要的一个方面，它不仅有利于了解TCGF产生的机理，而且能提供纠正TCGF失调的理论依据，从而对某些有关疾病予以控制。T细胞离开胸腺到周围组织后的进一步成熟分化，涉及到多种因子，而胸腺肽和TCGF均参与了这个过程。因此，了解胸腺肽对TCGF产生的作用是很有必要的。近年来国内不少资料表明，黄芪有明显的免疫调节作用。本文观察了胸腺肽、黄芪及地塞米松对正常人外周血单个核细胞产生TCGF的影响，并对胸腺肽的作用机理进行了初步探讨。材料和方法一，免疫调变剂胸腺肽制剂(中国医学科学院基础医学研究所生化室及北京东风制药厂产品)lmg／安瓿。黄芪(天津医药研究所产品)5ml／安瓿。地塞米松(广东省制药工业公司)5mg／安短。．二、免疫调变剂影响TCGF产生的试验采集正常献血员的肝素抗凝血，以葡蔗糖泛彭葡胺分离出单个核细胞，经PBS洗三次，以1X10。／ml细胞浓度悬于5％小牛血清的RPMll640培养液中，同时加入l％PHA—M(Difco)及不同剂量的免疫调变剂，设置无药的对照组。经37℃5％CO：孵育4叫、时离心，收获上清，保存在—20：C待测。!’三、免疫调变剂对细胞活性影响的测定将正常人周围血分离出的单个核细胞和高浓度的免疫调变剂(胸腺肽200gg／ml，地塞米松500~g／ml，黄芪l／10)在37~C5％CO,条件下，分别孵育48及96小时后，以台酚兰染色计数，观察活细胞的百分率·四，枯附细胞的去除将从周围血分离出的单个核细胞置24孔塑料培养板37℃5％CO。静置45分钟，然后用滴管轻轻将未贴壁的细胞吸入另一孔，再同样处理一次。经两次贴壁后回收的单个核细胞控制在70％左右。·五、TCGF活性的测定TCGF活性测定按Gillls方法加以修改”；。简述如下：用葡蔗糖一泛影葡胺分离正常人周围血的单个核细胞，然后用1％·本工作由中国科字院科学丛士资助卜之亡铲，b·、扣：·—．。Z'PHA-M刺激后，在含TCGF粗制品的培养基中培养一周左右。此时的淋巴母细胞完全依赖于TCGF增殖。将淋巴母细胞用PBS洗三次，以含小牛血清的培养液稀释成每1．5X10‘细咆／100M／：I乙再加入不同稀释度待测的TCGF制品。经37℃5％CO：孵育48／j、时后，每孑乙加0．5~ciaH-TdR，继续培养18／j、时，用收获器收获细胞后，以液体闪烁仪测定脉冲数。每次实验设己知cpm值的样品作为标准，以校正培养板之间或不同实验之间的误差。结果一、胸腺肽对TCGF产生的影响采用五种不同浓度的胸腺肽观察对TCGF产生的影响。起始浓度为200~g／ml，以后按100倍递减，即200~g／mlXl0+，200弘g／mlXl0·，，200gg／mlXl0—。，2009g／ mlXl0+。从表1中经过统计学处理有差别的数据，可看出增强抑制之比为13：6。因此，胸腺肽对TCGF的产生有不同程度的增强作用，低浓度的泎用较为明显，甚至2Pg／ml仍有作用。不同个体来源的细胞，对胸腺肽的反应性差异较大，有的可增强10倍左右(实验1)。；二、黄芪对TCGF产生的影响黄芪的作用和胸腺肽类似，也能促进TCGF的产生。虽然由峰值来看，6次实验似乎都有增强TCGF的产生，但由于高浓度(原液稀释10倍)时表现了极为显著的抑制作用。因此从总体来看，经统计学处理后，增强与抑制之比为13：6，而胸晾肽为13：6，因此两者作用近似。表l胸腺肽对TCGF产生的影响10。=libJg~g／m1厶增强P<0．05‘／q，制P<0，05‘，内为增强指数=骊鹦郢端端增强：抑制二L3：6表2黄芪对TCGF产生的影响．3·实验次数。H—胸腺嘧啶核苷掺入(cpm)无黄芪对照黄芪浓度—210·‘10-o10，o增加指数(峰值)10。二原液谴释10倍．增强(厶)：抑制(。)二13：6衷3地塞米松对TCGF产生的影响10。二500pg／mI二1．5X10—‘M三，地塞米桩对TCGF声生的影响地塞米松能抑制TCGF的产生已有报导‘“，我们的结果亦证实了地塞米松以抑制为主。此外，还发现在低浓度的·，地塞米松增强(厶)：抑制(。)二6：17也有促进TCGF的现象(表3)。为搞清产生此促进现象的原因，我们用不同来源的制剂(S咆ma公司的产品和国产制品)进行比较，结果两种制剂的作用极为相似(结果未列出)。四、免疫调变剂对TCGF产生约直接作用为了观察免疫调变剂是否能直接影响TCGF的产生，我们在培养体系内不加PHA，观察三种免疫调变剂对TCGF产生的作用。结果表明：胸腺肽，黄芪及地塞米松在无PHA存在时，均不能产生TCGF，与单独加培养液RPM“640的阴性对照结果相似(结果未列出)。因此，上述三种免疫调变剂，不能诱导TCGF产生，只能改变T细胞对PHA的反应性。五、高浓度免疫调变剂对细胞活性的影响表1—3均表明了高浓度的凋变剂对TC‘；F的产生有明显的抑制作用。为了排除因调变剂本身的细胞毒性作用引起这种抑制现象的可能性，我们用胸腺肽200~g／m1，黄芪1：10及地塞未松500~g／m1的浓度，分别和单个核细胞经48及96小时孵育后，观察细胞的活力。结果表明，无论经J8小时或96小时后，三种调变剂对细胞均无明显的毒性作用(表4)。六，胸腺肽对去除粘附细胞的单个核细胞产生TCGF的影响前文曾报导”，，去除单个核细胞中的粘附细胞能增强TCGF的产生。为了探讨胸腺肽作用的机理与粘附细胞有无关联，我们观察了胸腺肽对去除粘附细胞的单个核细胞产生TCGF的影响。结果再次证实，去除粘附细胞后能增强TCGF的产生(表5中C，D组所示)，但胸腺肽对去除粘附细胞(B组)和未去附粘附细胞(A组)两组的作用并无+差别。因此，胸腺肽可能是直接作用于活化的T细胞，或通过其他一些细胞或因子间接地作用于T细胞，但绝大多数的粘附细胞似乎和胸腺肽的作用无密切相关性。衷4免疫调变剂对细胞活力的影响．寸胆组18次实验平均仪妄生组i文实验平均仇黄民(原液稀释10倍)询耻队(200gg／m1)迪皇米松(5G0踞／m1)表5胸腺肽对去除粘附~tttI包的单个核细胞产生TCGF的影响丰—垃次数。H—询噪嘧啶核苷掺八(cpm)———————-——-—一———-——————-…—-——--——一一——-——-ABCD未处理的单个核细胞去除帖咐细胞的单个核细胞(1)-TP·(2)+TP(3)-TP(4)、+TP(2)／(1)(4)j(3)(3)／(1)(4)／(2)胸保肽(．1、P)二200弘g／m]X10—‘影响TCGF产生的药物有数种，如搪皮质激素，环孢素A、前列腺素等对TC'GF的产生均有抑制作用，消炎痛、乙醇肉豆蔻佛波醇(PMA)则有促进作用。我们的试验结果表明，胸腺肽和黄芪能增强TCGF的产生，而地塞米松则产生相反的作用。Smith‘：’报＼导地塞米讼在10—。M时有明显的抑制作用，而我们的试验在同样剂量时有的结果却显示了促进作用(表3，实验1，5)，这些不同可能与个体差异有关。胸腺肽是内源性的免疫凋变剂，具有多种免疫功能。其中胸腺素组分(o真)可促进T辅助细胞前俸分化成辅助T细胞：”，从而增强TCGF的产生。由于胸腺肽是内在的调节因子，因此在正常情况下经过反馈系统的自我调节，使T辅助细胞和T抑制细胞的比例处于稳定状态。这一点可能较黄茂或地塞米松等调变剂更有独到之处。前文”’曾报导，去除大部份粘附细胞后，可以增强TCGF的产生。这很可能是由于去除了部份能分泌前列腺素的抑制细胞”：，但这部份被去除的抑制细胞似乎和胸腺肽的作用无关。地塞米松的作用机理主要是抑制T细胞活化的晚期阶段，因此不影响对致有丝分裂·原的反应性，这和环孢素A的作用机理不同，后者主要抑制T细胞活化的早期阶段。粘附细胞的产物可部份消除地塞米松的抑制作用‘”。因此，地塞米松是直接抑制T辅助．5．细胞产生TCGF，抑或阻止T辅助细胞对IL-1的反应，尚有待研究。黄芪的免疫功能国内已有一些报导，如促进致有丝分裂原的T细胞增殖反应“，，增强NK细胞的活性”’等。从我们的试验结果来看，黄芪可能通过活化T细胞而促使T辅助细胞加强TCGF的产生，而后者可增加NK细胞的活性。此外，黄芪的作用有显著的剂量依赖关系，在高浓度时，呈现很强的抑制作用。这种双重现象目前还难以解释。因此，研究免疫调变剂的作用，不仅是为免疫治疗提供一个新的手段，更重要的是可作为一种探针来探讨机体内错综复杂的免疫网络和病变发生的因果关系，特别是从分子免疫学的角度来主动而有效的控制疾病。；本文承中国医学科学垸基础医学研究所刘士廉教授提供胸睬肽制剂并提出宝贵意见，铁路总院孙琳大夫赠送黄苠制剂，持此致谢。)参考文献1．二易七。中华微生初中和免疫学尔；乞1984；l：69．2．Sm“hKA．ImmunOIRev1980；51：337．3．Zat2MW， et a1．Bi010gicalResPonses inCancer1982；1：219．1．RappaportRS，et a1．JExpMed1982；155：943．5．LarrsOnEL．JImmun0；124：2828．6．孙燕，等。中华微生物学和免疫学杂志1983；3：·211。7．常春燕，等。中国医学科学院学报。1983；5：231．(1985年5月8日收稿，7月lsE修回)StudieS on—TCellGrowthFactorE“ectOf lmmuno-modula“ngAgentsOilTCellGrowthFactorProductiOnWuYi-yuanZhangJunYangYi(CancerResearch lnstitute，ChineseAcademyO厂MedicalScien：e‘，Bei／{ng)Three immuno—modulating agents，calf thymic peptides(TP)，astra6alus membrana—·6．中国免疫学杂志1985年第l卷第5期 ceus(AM) and dexamethasone(Dex) have been investigated for their ability tO induceTCGF production by human peripheral blood leukocytes．TP andAM enhanced whereasDex inhibitedTCGF production．The effect ofAM onTCGF production was dose-dependent．At high concentration，AM gave rise inhibition．However，it was proved not due tO toxicityOfAM．In the absenceOfPHA，all three modulating agents could not induceT cells±O produceTCGF．There was a great individual ariationOf respon- ses tO the modulating agents，It appeared that the adherent cells were not involved inTP-induced enhancementOfTCGF production．